雑誌名：Metabolites
ジャンル：原著論文
掲載年：2025年
原題：Investigation of metabolites in feces and plasma associated with the number of piglets weaned per sow per year
研究機関：株式会社栄養・病理学研究所（筆頭著者・塚原，第三著者・川瀬），摂南大学農学部，北海道大学農学部，日清丸紅飼料株式会社，有限会社あかばね動物クリニック，豊橋飼料株式会社
弊社職員の役割：アミノ酸濃度測定

アミノ酸分析は，弊社ではWaters社製の誘導体化試薬（AccQ.Tag）を用いて，LC-MS/MSでの検出を採用しておりますが，血漿などアミノ酸が十分に含まれているサンプルについては，アミノ酸専用カラム（Intrada Amino Acid）を用いた分離，及びLC-MS/MS検出での定量法を採用しております。本分析法は，誘導体化試薬を用いていないため，かなり分析費用を抑えることが可能です。今回は安価版のアミノ酸定量法をご紹介いたします。
【検体の前処理】
① 標準物質としてアミノ酸混合標準液AN-Ⅱ型及びB型（富士フイルム和光純薬），単品のL-アスパラギン，L-グルタミン，L-トリプトファンを用い，各物質の濃度が500，100，50，10，5，1，0.5及び0.1 μmol/L濃度となるように調整します。
② 内部標準物質としてアミノ酸安定同位体混合水溶液（13C15N，A400073，大陽日酸）を2 mmol/L濃度となるように調整します。
③ 血漿100 μLに対し内部標準物質5 μL及びLCMS用超純水400 µLを加えボルテックス後，全量を限外ろ過フィルターユニット（Amicon Ultra-0.5 mL 3K，Millipore）にロードし，4℃，14,000 gの条件で15分間遠心分離します。そのろ液を分析に供しております。

【UPLC-MS/MSを用いた定量】
① 分析には弊社所有のUPLC-MS/MS (ACQUITY UPLC；Waters)を用いて行っております。装着するカラムはIntrada Amino Acid 3.0 μm×100×3.0 mm (Imtakt)です。分析条件は以下となります。A液：アセトニトリル/テトラヒドロフラン/25 mMギ酸アンモニウム/ギ酸= 9 /75 /16 /0.3を用いました。B液：アセトニトリル/100 mMギ酸アンモニム = 20 / 80を用いました。流速は0.6 mL/minとし，グラジエント条件は0-3 min (A液100 %)，3-9 min (A液100-83 %)，9-9.5 min (A液83-0 %) ，9.5-16 min (A液0 %)としました。インジェクション量は5 μL，カラム温度は35℃，サンプル温度は4℃としました。
② 質量分析計での検出：弊社所有のACQUITY TQD MS system (Waters)を用いて行っております。条件は以下となります。イオン化はESI positive，キャピラリー電圧は3.0 kV，脱溶媒ガスは850 L/hr，脱溶媒温度は450 ℃，イオン源ヒーターは150 ℃，コーンガス流量は60 L/hrとしました。MRM条件など詳細は下記論文をご参照下さい。

以上となっております。これらの分析法については，以下のリンクに示す論文に記載されておりますので，併せてご確認いただければ幸いです。