雑誌名：Metabolites
ジャンル：原著論文
掲載年：2025年
原題：Investigation of metabolites in feces and plasma associated with the number of piglets weaned per sow per year
研究機関：株式会社栄養・病理学研究所（筆頭著者・塚原，第三著者・川瀬），摂南大学農学部，北海道大学農学部，日清丸紅飼料株式会社，有限会社あかばね動物クリニック，豊橋飼料株式会社
弊社職員の役割：トリメチルアミン-N-オキシド（TMAO）分析

【検体の前処理】
① 標準物質としてTrimethylamine N-Oxide（TMAO；東京化成）及びSanta Cruz Biotechnology 製のPhenylacetyl L-Glutamine（PAGln）を用い，10 mmol/L濃度となるように調整します。
② 同様に内部標準物質としてTrimethylamine-d9 N-Oxide（CAYMAN）を用い，1 mmol/Lとなるように調整します。
③ 標準物質は0，0.05，0.1，0.5，1，5，10，50及び100 μmol/L濃度となるように超純水で希釈後，各濃度の標準物質200 μLに対し内部標準物質を20 μL添加し，分析に供します。
④ 血漿200 μLを1.5 mL容量の爪付きチューブ（Watson）に採取し，内部標準物質を20 μL添加後，ボルテックスします。全量を3K Amicon Ulrta限外ろ過フィルター（Merck Millipore）にロードし，4 ℃，14,000 gの条件で15分間遠心分離後，ろ液を全量分析用バイアルに移し，以下の分析に供します。

【UPLC-MS/MSを用いた定量】
① 分析には弊社所有のUPLC-MS/MS (ACQUITY UPLC；Waters)を用いて行っております。装着するカラムはInertsil HILIC 3.0 μm×150×2.1 mm (GLサイエンス)です。分析条件は以下となります。A液：0.1%ギ酸（10 mM酢酸アンモニウム添加）用いました。B液：LC-MS用アセトニトリル（10 mM酢酸アンモニウム添加）を用いました。流速は0.25 mL/minとし，グラジエント条件は0-3 min (A液100 %)，3-4 min (A液100-60 %)，4-7 min (A液60 %) ，7-8 min (A液60-0 %)，8-14 min (A液0 %)としました。インジェクション量は3 μL，カラム温度は40℃，サンプル温度は4℃としました。
② 質量分析計での検出：弊社所有のACQUITY TQD MS system (Waters)を用いて行っております。条件は以下となります。イオン化はESI positive，キャピラリー電圧は2.5 kV，脱溶媒ガスは850 L/hr，脱溶媒温度は450 ℃，イオン源ヒーターは150 ℃，コーンガス流量は50 L/hrとしました。MRM条件など詳細は下記論文をご参照下さい。

以上となっております。これらの分析法については，以下のリンクに示す論文に記載されておりますので，併せてご確認いただければ幸いです。