雑誌名：Animal Science Journal
ジャンル：原著論文（査読あり）
掲載年：2018年
原題：Inclusion of Bacillus amyloliquefaciens strain TOA5001 in the diet of broilers suppresses the symptoms of coccidiosis by modulating intestinal microbiota.
研究機関：株式会社栄養・病理学研究所（筆頭著者・塚原，第三著者・中山），京都府立大学生命環境学部，東亜薬品工業株式会社
弊社職員の役割：研究統括，臨床観察，剖検，DNA抽出，次世代シーケンサーを用いた菌叢網羅解析，腸内細菌のreal-time PCRを用いた定量解析，腸管及び全臓器の病理組織学的検査，結果考察，論文執筆

内容解説：だ液・糞便・腸管内容物など，生体が微生物と共生している部位からDNAを抽出し，細菌数解析や菌叢網羅解析などの分析に供しています。
弊社では，抽出効率などを鑑みて，市販キットQuickGene DNA tissue kit S（クラボウ）を用い，さらに核酸自動分離システム（QuickGene-810 system，クラボウ）を併用することで，安定したDNA抽出を実現しております。抽出法を下記に示します。

1.0φジルコニアビーズ及び0.1φガラスビーズを予め入れた滅菌2mL容ねじ口チューブにサンプル25 mgを精秤する。キット添付のバッファー（MDT）を250 µL加え，Micro-Smash MS-100 (TOMY)で3,000 r.p.m.×120 sec×2回の破砕処理を行う。破砕液にキット添付のプロテナーゼKを25 µL加え，よく混合後，55℃のドライバスで2時間静置する。終了後，遠心分離 (15,000×g，10分，室温) を行う。上清200 µLを新しい滅菌1.5 mL容マイクロチューブに採取し，キット添付のライシスバッファー（LDT）を180 µL加え，よく攪拌後，70℃のドライバスに10分静置する。終了後，フラッシングし，99.5%特級エタノールを240 µL加え，よく攪拌する。遠心分離 (8,000×g，1分，室温) 後，上清すべてをQuickGene-810 systemにセットしたキット付属のフィルターへ入れる。自動精製を行う。精製後，キット添付のElution Bufferで溶出させ，DNA抽出液を得る。
本DNA抽出法は，特別にご要望を頂かない限りは弊社デフォルトの方法であり，冒頭に記載している論文の他にも，数々の論文で使用しております。最近掲載された論文を一例として下記に示します。
・ヒト2型糖尿病患者の腸内細菌構成探索　https://doi.org/10.3164/jcbn.17-44
・ブタ浮腫病実験感染系の改良　https://doi.org/10.1111/asj.12769
・ブタ臨床現場での生菌剤給与効果　https://doi.org/10.1111/asj.12565