雑誌名：Bioscience of Microbiota, Food and Health
ジャンル：原著論文（査読あり）
掲載年：2018年
原題：Stimulation of murine cell-mediated immunity by dietary administration of a cell preparation of Enterococcus faecalis strain KH-2 and its possible activity against tumour development in mice.
研究機関： 株式会社栄養・病理学研究所（筆頭著者・塚原，第二著者・中村），有限会社バイオ研，NPO法人日本サプリメント臨床研究会，株式会社ブロマ研究所
弊社職員の役割：研究統括，研究企画，飼育観察，剖検，ナチュラルキラー活性及び細胞障害活性測定（フローサイトメトリー），RNA抽出，脾臓細胞中のNK活性関連因子mRNA発現解析（real-time PCR），脾臓細胞中の活性型T細胞割合測定（フローサイトメトリー），結果考察，論文執筆

内容解説：ナチュラルキラー活性は，ヒトであれば主に抗がん効果の指標として，家畜であれば抗ウイルス活性の指標として分析を行います。血液中の白血球を用いてでも測定できますので，継時的な測定も実施可能です。本研究ではマウスを用いておりますので，脾臓細胞を用いて分析を行いました。以下にマウスでのナチュラルキラー活性分析法を示します。
①セルストレーナーを用いて，脾臓細胞を分離する。
②赤血球をACK lysing bufferを用いて除去し，洗浄後，RPMI 1640培地に細胞を懸濁し，細胞数をカウントする。この細胞をエフェクター細胞とする。
③ターゲット細胞としてYAC-1細胞を使用する。YAC-1細胞をDioc18で染色する。
④DiOC18で蛍光標識したターゲット細胞に，エフェクター細胞を任意の割合で混合し，37℃で4時間，5% CO2インキュベーター内で培養する。
⑤培養終了後，Propidium iodideで死細胞を染色する。
⑥染色後，速やかにBD Accuri™ C6 フローサイトメーターで解析する。
⑦ターゲット細胞とエフェクター細胞を共培養したサンプルのターゲット細胞死数，ターゲット細胞を単独培養したサンプルのターゲット細胞死数（自然細胞死数），及びターゲット細胞にサポニンを添加したサンプルのターゲット細胞死数（最大細胞死数）をそれぞれ算出し，ナチュラルキラー活性を算出する。
　以上のように弊社では，Dioc18及びフローサイトメーターを用いた分析法を採用しております。本分析法は上記雑誌のほか，「Orally administered Salacia reticulata extract reduces H1N1 influenza clinical symptoms in murine lung tissues putatively due to enhanced natural killer cell activity」（Frontiers in Immunology）ででも行っております。
接種したがん細胞に対する細胞障害（CTL）活性もフローサイトメトリーを用いて実施可能です。また，他の動物，例えばブタのナチュラルキラー活性もK562細胞をターゲットとして用いることで，実施可能です。ナチュラルキラー活性の検討をお考えの方は，是非弊社までお声がけ頂ければ有難いです。