雑誌名：Metabolites
ジャンル：原著論文
掲載年：2022年
原題：Metabolism of imidazole dipeptides, taurine, branched-chain amino acids, and polyamines of the breast muscle are affected by post-hatch development in chickens.
研究機関： 京都大学農学部，株式会社栄養・病理学研究所（第二著者・川瀬，第三著者・塚原），日本獣医生命科学大学応用生命科学部
弊社職員の役割：イミダゾールジペプチド測定，結果考察

【検体の前処理】
① 標準物質としてカルノシン，アンセリン，タウリン及びバレニンを用い，各物質の濃度が10〜500 μmol/Lとなるように超純水で濃度調整します。
② 内部標準物質として，L-ヒスチジン塩酸塩一水和物（ring-2-13C）及びL-グルタミン（d5）を用い，両物質の濃度が0.1 mg/Lとなるように超純水で濃度を調整します。
③ 凍結粉砕処理済みのニワトリ筋肉重量100 mgに対し，400 μLの0.2 M過塩素酸及び5.5φステンレスビーズ（TOMY）1個を加え，3,000 rpmの条件で30秒間ビートビーディングします。
④ 暗所氷上で30分間静置し，15,000 g，4℃の条件で15分間遠心した後，上澄みを0.2 μmのフィルター（mdi Membrane Technologies）でろ過します。
⑤ ろ液20 μLに対し，内部標準物質を5μL添加しボルテックスします。誘導体化にはWaters製のAccQ-Tag誘導体化キットを使用し，ホウ酸バッファー140 μL及び誘導体化試薬40 μLを加えボルテックス後，55℃で15分間反応させ，分析に供します。

【UPLC-MS/MSを用いた定量】
① 分析には弊社所有のUPLC-MS/MS (ACQUITY UPLC；Waters)を用いて行っております。装着するカラムはAccQ-Tag Ultra Column 2.1 i.d. × 100 mm, 1.7 μm particles (Waters)です。分析条件は以下となります。A液：AccQ-Tag誘導体化キット付属のA液を超純水で10倍希釈して用いました。B液：AccQ-Tag誘導体化キット付属のB液を用いました。流速は0.7 mL/minとし，グラジエント条件は0-0.54min (A液99.9%)，0.54-5.74min (A液99.9-90.9%)，5.74-7.74min (A液90.9-78.8%) ，7.74-8.04min (A液78.8-40.4%)，8.04-8.05min (A液40.4-10%)，8.05-8.64min (A液10%)，8.64-8.73min (A液10-99.9%)としました。インジェクション量は1 μL，カラム温度は55℃，サンプル温度は4℃としました。
② 質量分析計での検出：弊社所有のACQUITY TQD MS system (Waters)を用いて行っております。条件は以下となります。イオン化はESI positive，キャピラリー電圧は3.0 kV，脱溶媒ガスは900 L/hr，脱溶媒温度は450 ℃，イオン源ヒーターは150 ℃，コーンガス流量は60 L/hrとしました。MRM条件など詳細は下記論文をご参照下さい。

以上となっております。これらの分析法については，以下のリンクに示す論文に記載されておりますので，併せてご確認いただければ幸いです。