雑誌名：Scientific Reports
ジャンル：原著論文（査読あり）
掲載年：2018年
原題：Hippocampal metabolism of amino acids by L-amino acid oxidase is involved in fear learning and memory.
研究機関： 岐阜大学応用生物科学部，東京農工大学共同獣医学科，株式会社栄養・病理学研究所（第二著者・川瀬，第七著者・塚原），理化学研究所イノベーション推進センター，富山大学研究推進総合支援センター，College of Biological Science and Technology, Beijing Forestry University，京都大学農学部，Institute of Zoology, Chinese Academy of Sciences
弊社職員の役割：海馬内のモノアミン系物質濃度解析

内容解説：アミノ酸は，脳の機能維持にとくに重要な物質です。本研究は，脳内のアミノ酸代謝を検討するため，L-アミノ酸酸化酵素（LAO）に焦点を当てて，LAOノックアウトマウスを用いてその重要性を検証しております。LAOノックアウトマウスは恐怖への学習・記憶が抑制されることがわかったため，海馬内のモノアミン系物質（キヌレン酸，チロシン，3-ヒドロキシキヌレニン，キヌレニン，トリプトファン，γアミノ酪酸＝GABA，アドレナリン，アセチルコリン，ドーパミン，セロトニン）濃度測定を弊社が担当致しました。以下にその分析手順・方法を記載いたします。

サンプル前処理
①脳サンプルに5容量の0.2M PCAを添加する。
②ビートビーダー（MS-100, Tomy）で30 sec，3,000 rpmの条件でビートビーディングを行う。
③氷上で30 min静置する。
④20,000g×15 min, 0 ℃の条件で遠心分離を行う。
⑤上清を0.20 μm Cellulose Acetateメンブレンフィルターでろ過する。

分析方法
●LC条件
装置: Acquity TQD UPLC-MS/MS (Waters)
カラム: Intrada Amino Acid 100 x 3 mm (Imtakt)
カラム温度: 37 ℃
移動相A: メタノール/超純水/ギ酸＝80/20/0.3
移動相B: メタノール/100mMギ酸アンモニウム＝30/70
流速: 0.6 mL/min
グラジェント条件: 0-1min (A: 80%), 1-10min (A: 80-0%), 10-20min (A: 0%)
分析時間：20 min
注入量: 10 μL
●MS条件
脱溶媒ガス温度: 450 ℃
ソース温度: 150 ℃
キャピラリー電圧: 3.0 kv
イオン化モード: ESI positive
モニターイオン（コーン電圧）
　　キヌレン酸: 190.2 m/z（28 v）
　　チロシン: 182.3 m/z（28 v）
　　チロシンIS（13C15N）: 192.3 m/z（28 v）
　　3-ヒドロキシキヌレニン: 225.3 m/z（28 v）
　　キヌレニン: 182.3 m/z（28 v）
　　トリプトファン: 205.3 m/z（28 v）
　　トリプトファンIS（13C15N）: 218.3 m/z（28 v）
　　GABA: 104.4 m/z（18 v）
　　アドレナリン: 184.3 m/z（28 v）
　　アセチルコリン: 146.3 m/z（30 v）
　　ドーパミン: 154.3 m/z（28 v）
　　セロトニン: 177.3 m/z（30 v）